中國科學(xué)院水生生物研究所研究人員在萊茵衣藻中建立了一套利用人工miRNA敲除基因的技術(shù)平臺。該技術(shù)利用衣藻內(nèi)源miRNA前體做為骨架，針對葉綠體相關(guān)基因VIPP1和鞭毛基因CDPK3分別構(gòu)建人工miRNA，采用8條引物退火合成人工miRNA前體的一步構(gòu)建法和熒光素酶基因融合表達(dá)的方法，實現(xiàn)快速構(gòu)建和篩選的目的。具有操作簡單、成本低、篩選高效等優(yōu)點。主要實驗結(jié)果如下：（1）通過一步法退火合成人工miRNA前體結(jié)構(gòu)，并將熒光素酶基因和一步法合成的人工miRNA前體結(jié)構(gòu)融合于PsaD啟動子下游共表達(dá)。通過檢測熒光素酶活性或利用Photo counting 相機(jī)直接成像，快速篩選靶基因敲降克隆。靶蛋白VIPP1可下降至野生型的22-74%。（2）人工miRNA干擾效果會隨時間減弱，篩選到的陽性克隆在*月的干擾效果*好。（3）通過在熒光素酶基因和人工miRNA前體之間融合入內(nèi)源基因RBCS2的內(nèi)含子1或內(nèi)含子3，明顯增強(qiáng)了熒光素酶活性和人工miRNA的干擾效果。較未加內(nèi)含子的陽性克隆，熒光素酶活性分別增強(qiáng)至333%或401%，而靶蛋白VIPP1含量也比野生型下降至5%或3%。將內(nèi)含子3融合入靶基因為CDPK3的人工miRNA載體中，也可使靶蛋白CDPK3下降至野生型的5%。（4）誘導(dǎo)型NIT1啟動子在人工miRNA表達(dá)載體中同樣適用，通過更換培養(yǎng)基中氮源為氨基鹽或硝酸鹽，從而抑制或誘導(dǎo)干擾載體的表達(dá)。