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從細胞中提取酶，破碎時間長會影響到酶的活性
2015-04-10 09:46:52 來源：上海旌派超聲波細胞粉碎機
問題一：從細胞中提取酶，破碎時間長會影響到酶的活性，怎么辦？
解析：如果需要的是胞內酶，細胞破碎程度和需要的酶獲得之間基本上有正比關系。破碎時間長的確會影響到酶的活性。這就需要在*佳的破碎時間和酶活性之間做出判斷，*直接的辦法是先繪制相關曲線（酶活性和時間的關系曲線）。如果實驗中破碎的是棒狀桿菌（也是很難破壁的G+菌），破碎時間控制在30min左右，酶活較好。如果是基質菌絲的話,好可以考慮用溶菌酶處理一下。
問題二：怎樣合理選擇超聲波破碎參數（條件）？
解析：不同型號的設備功率不一樣，功率的大小決定了使用變幅桿的大小范圍（直徑2mm至幾十毫米），你使用多大的變幅桿就在設備的上調至該刻度（很簡單的）！變幅桿的大小決定了處理量。一般情況，5ml以下選3mm，5～50ml可選6～8mm，50ml以上選10mm以上的變幅桿！占空比不用關心，主要是指超聲時間和停頓時間的比值。
問題三：為什么用塑料大試管,玻璃的不可以嗎？
解析：不可以的，如果使用玻璃管，可能會碎裂，而通常使用的是塑料試管。超聲波是物質介質中的一種彈性機械波，它既是一種波動形式,又是一種能量形式。超聲對細胞的作用主要有熱效應，空化效應和機械效應。熱效應是當超聲在介質中傳播時，摩擦力阻礙了由超聲引起的分子震動，使部分能量轉化為局部高熱（42－43℃）。空化效應是在超聲照射下，生物體內形成空泡，隨著空泡震動和其猛烈的聚爆而產生出機械剪切壓力和動蕩。另外，空化泡破裂時產生瞬時高溫（約5000℃）、高壓（可達500×104Pa），可使水蒸氣熱解離產生.OH自由基和.H原子，由.OH自由基和.H原子引起的氧化還原反應可導致多聚物降解、酶失活、脂質過氧化和細胞殺傷。機械效應是超聲的原發效應，超聲波在傳播過程中介質質點交替地壓縮與伸張構成了壓力變化，引起細胞結構損傷。損傷作用的強弱與超聲的頻率和強度密切相關。
問題四：100g大腸桿菌溶于1L破碎液里（破碎掖：50mMTris-Cl(PH8.5)5mMEDTA0.14MNaCl），攪拌，發現菌液發粘，菌體不能夠很好分散，用高壓勻質機破碎，加壓后，菌液不能進入勻質機，速度很慢，請問是何原因？
解析：能有好的辦法解決，很好用勻質機快速破碎菌體？解析：將破碎液的量加大，不能很好分散可能是量太大；超聲處理5－10分鐘，菌液粘度即可大大降低，也可促進菌體分散。
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