12孔固相萃取儀在中草藥中黃曲霉毒素檢測中的應(yīng)用
為進(jìn)一步加強(qiáng)中草藥的質(zhì)量控制，國家藥典委委員會有關(guān)單位和專家對黃曲霉毒素、重金屬及有害元素、農(nóng)藥殘留量等有害物質(zhì)的控制方法、限度值以及重點(diǎn)品種進(jìn)行試驗(yàn)研究，在2010年版《中國藥典》的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步增加中藥的安全性指標(biāo)控制項(xiàng)目，尤其是加強(qiáng)對中藥材中重金屬及有害元素、黃曲霉毒素、農(nóng)藥殘留量的控制。其中關(guān)于黃曲霉毒素限量標(biāo)準(zhǔn)：對《中國藥典》收載的柏子仁、蓮子、使君子、檳榔、麥芽、肉豆蔻、決明子、遠(yuǎn)志、薏苡仁、大棗、地龍、蜈蚣、水蛭、全蝎等14味藥材及其飲片品種項(xiàng)下增加“黃曲霉毒素”檢查項(xiàng)目，限度為“黃曲霉毒素B1不得過5μg/kg；黃曲霉毒素G2、黃曲霉毒素G1、黃曲霉毒素B2總量不得過10μg/kg”。
黃曲霉毒素檢測方法如下：
1.       提取：取樣品粉末15g，過二號篩，加入氯化鈉3g，置于均質(zhì)瓶中，加入70%甲醇溶液75 mL，高速攪拌2分鐘（攪拌速度大于11000轉(zhuǎn)/分），離心處理5分鐘（離心速度2500轉(zhuǎn)/分），精密量取上清液15 mL，置于50 mL離心管中，用水稀釋，漩渦振蕩器混勻，用溶劑過濾器配合無油隔膜真空泵進(jìn)行過濾，使用濾膜孔徑為0.45 µm。
2.       萃取：使用固相萃取裝置配合無油隔膜真空泵萃取樣品，使用3ml免疫親和柱。
a．將固相萃取柱安裝在固相萃取儀的閥門上，準(zhǔn)確移取15.0 mL樣品提取液注入小柱，調(diào)節(jié)真空泵的壓力使溶液以約6 mL /min流速緩慢通過免疫親和柱，隨后調(diào)節(jié)閥門，使液體以1-2 d/s的速度流出；
b. 用10 mL水淋洗免疫親和柱兩次，棄去全部流出液；
c. 再用1. 0 mL色譜級甲醇洗脫，流速為1 mL/min-2 mL/min，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測用，流速為1 d/s。
3.       測定：
高效液相色譜條件：
色譜柱：Ultimate® XB-C18，5 μm， 4.6×150 mm
流動相：甲醇 : 乙腈 : 水（40 : 18 : 42）
流速：0. 8 mL/min
熒光檢測器激發(fā)波長365 nm, 發(fā)射波長445 nm
a．碘溶液柱后衍生化法
衍生溶液：0. 05％碘溶液 （稱取碘0.5g，加入甲醇100 mL使其溶解，用水稀釋至1000 mL）
衍生溶液流速：0. 3 mL/min
反應(yīng)管溫度：700℃
反應(yīng)時間：1 min
b．光化學(xué)衍生法：光化學(xué)衍生器（254 nm）。
4.       定量
精密量取黃曲霉毒素混合標(biāo)準(zhǔn)品（黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2標(biāo)示濃度分別為1. 0 µg/mL、0.3 µg/ mL、1.0 µg/ mL、 0.3 µg/ mL），置于10 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，作為儲備液。精密量取儲備液1 mL，置于25 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。
分別精密吸取上述混合對照品溶液5 µL、10 µL、15 µL、20 µL、25 µL，注入液相色譜儀，測定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。另吸供試品溶液20～25µl，注入液相色譜儀，測定峰面積，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品中相當(dāng)于黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2的量。
    取樣品洗脫液1. 0 mL加入重蒸餾水定容至2. 0 mL，用進(jìn)樣器吸取100 μL注人高效液相色譜儀，在上述色譜條件下測定試樣的響應(yīng)值（峰高或峰面積）。經(jīng)過與黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液譜圖比較響應(yīng)值得到試樣中黃曲霉毒素B1、B2、G1和G2的濃度。
我公司用于此類分析的儀器：
一．USE系列固相萃取儀
二．UVS系列漩渦混勻器
三．固相萃取柱